1.招标项目: 福建省动物疫病预防控制中心2015年试剂采购项目

2. 招标编号: XFZB-2015-19

3.采购人: 福建省动物疫病预防控制中心

联系人：饶静静             联系方式：0591-87857110

4.采购代理机构: 福建信发招标代理有限公司

地址: 福州市五一中路188号汉庭酒店2楼（汽车南站旁）

联系人:孙秀娟    联系方式：0591-88002309     传真：0591-88002607

5.首次公告日期：2015年5月25日

6.变更内容：

（1）招标文件第10页合同包4品目号4-1 禽白血病抗原 规格原先的192次/盒变更为480次/盒，同时招标文件第229页技术参数中禽白血病抗原规格由（96孔*2板）/盒变更为（96孔*5板）/盒。

（2）第10页合同包4品目号4-5  PRV gb抗体 规格原先的480次/盒，变更为576次/盒，同时招标文件第235页技术参数中规格原先的480次/盒变更为576次/盒

（3）第10页合同包4品目号4-6  PRV ge抗体 规格原先的480次/盒变更为576次/盒，同时招标文件第238页技术参数中规格原先的480次/盒变更为576次/盒

（4）第10页合同包4品目号4-3由原先的：

4-3

传染性喉气管炎抗体

传喉气抗体检测

480次/盒

变更为：

4-3

传染性支气管炎抗体

支气管抗体检测

480次/盒

同时在招标文件的232-234页中包4品目号4-3的技术参数由原先的

品目号4-3 传染性喉气管炎抗体 传喉气抗体检测

传染性喉气管炎（ILT）抗体ELISA检测试剂盒，可以从鸡的血液样品中检测ILT抗体的量。微量板用已灭活的ILT抗原包被，将稀释的鸡血清样品加入到微量孔中，样品中ILT抗体将与包被的抗原形成抗原抗体复合物。非特异性抗体和其它血清蛋白被洗去。将碱性磷酸酶标记的抗鸡IgG抗体加入孔中，与抗原抗体复合物结合，然后再洗去未反应的结合物。pNPP显色剂作为底物被加入，如果ILT抗体存在，则显黄色。颜色强度与样品中抗ILT抗体的含量相关。

提供的试剂

ILT包被板 （Coated plates）: 包被有灭活病毒抗原的微量板。

酶标二抗 (Conjugate reagent) :碱性磷酸酶标记的抗鸡抗体：内含蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料的磷酸盐缓冲液。

底物片(Substrate tablets) PNPP（4-硝基苯磷酸二钠盐）：用底物缓冲液溶解后使用。

底物缓冲液(Substrate buffer):含有与酶反应相关物质的二乙醇胺缓冲液。

终止液(Stop Solution):含有NaOH的二乙醇胺缓冲液。

样品稀释液(Sample Diluent):含有蛋白稳定剂和叠氮化钠（0.1% 重量/体积）的磷酸盐缓冲液。

洗液(Wash Buffer):含有吐温的磷酸盐缓冲液（粉）。

阴性对照(Negative Control):含SPF鸡血清的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及蓝色染料。

阳性对照(Positive Control):含特异性ILT抗体的磷酸盐缓冲液：内含有蛋白稳定剂和叠氮化钠防腐剂（0.1% 重量/体积）及红色染料。

材料和设备要求（试剂盒未提供） 

精确的微量移液器和一次性吸头 

8或12孔道的微量移液器

稀释样品的塑料管 

蒸馏水或去离子水 

含405nm波长的酶标仪

注意事项 

1．处理各种试剂要小心。终止液中含有腐蚀性的强碱，如果溅到皮肤或眼中，用大量的清水洗涤。

2．把各种生物材料都看成具有潜在的生物危险性物，包括所有的外来样品。在销毁之前，要用漂白粉或其它强氧化剂，将用过的反应板和废弃液进行消毒。

3．不要用嘴碰移液器。在使用试剂盒中的试剂和处理样品的地方，不要吃东西，喝水或吸烟。

4．试剂盒仅供体外使用。

5．严格按照检测规程操作才能取得最好的结果。

试剂的准备

1．底物试剂：取1片底物放入洁净容器中，加入5.5-6ml的底物缓冲溶液，混合直到完全溶解。本试剂最好是现用现配，配置好的底物溶液可以在+4℃下避光保存1周。请勿用手直接触拿底物片。

2．洗液：将1袋洗液完全倒入1升蒸馏水或去离子水中，混合使其完全溶解。洗液可在+4℃保存1个月。

3．试剂盒中的其它成分可以直接使用，使用前要回温至室温（22-27℃）。

样品的准备

每个样品按照1:500稀释，即1μl样品加0.5ml的样品稀释液。

1．用旋涡混合器或振荡器混合均匀。

2．每份样品都要换一个未用过的新吸头。

3．稀释管清晰地标有样品号。

试剂盒中的阳性和阴性对照不要稀释！ 

操作步骤

1．从密封袋中取出用ILT包被的反应板，在记录纸上记录样品的位置。

2．在A1和B1孔中加入100μl的阴性对照。

3．在C1和D1孔中加入100μl的阳性对照。

4．加100μl稀释好的样品加入到相应的板孔中，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育60分钟。

5．倒出孔中的内容物，用洗液洗4次(每孔300μl)。最后一次倒转反应板，在吸水纸上轻轻拍打。 

6．各孔加100μl酶标二抗，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育60分钟。

7．重复步骤5。

8．各孔加100μl底物试剂，用盖子盖住反应板，在室温（22-27℃）下孵育30分钟。

9．各孔加100μl终止液，终止反应。

10．空气调零，以405nm的波长于酶标仪测定各孔的吸光度。

结果

为确保试验有效，阴性对照的平均吸光度应该小于0.3，阳性对照的平均值和阴性对照的平均值之差应大于0.15。

实验室的温度不同，所得到的结果会有误差。根据实验对照的结果判定实验的有效性。

阳性对照是标准化的试剂，它代表ILT抗体的含量。样品中抗体的含量可以通过阳性对照来计算。用S/P值（样品与阳性对照的比值）来表示抗体。

结果判定

1．S/P值的计算

S/P值大于等于0.5 可判定为阳性

2．抗体滴度的计算

Log10效价＝1.1×Log10S/P + 3.361

逆对数＝效价

    3．判定标准

S/P值                   效价范围                    抗体状况

≤0.499                   ≤1070                       阴性

≥0.500                   ≥1071                       阳性

 

变更为：

品目号4-3 传染性喉气管炎抗体  支气管抗体检测

传染性支气管炎病毒抗体检测试剂盒是用于检测鸡血清中传染性支气管炎病毒（IBV）抗体的酶联免疫检测试剂盒。

概述

传染性支气管炎的血清学鉴定和免疫状态的评估需要检测血清中 IBV 抗体水平。酶联免疫 测定系统被证明在 IBV 抗体水平的定量检测中是有效的，适用于鸡群免疫状态的监测。

原理

本试验设计用于检测鸡血清中 IBV 抗体的相对水平。本试验用 IBV 病毒抗原包被 96 孔微量 板。被检样品加入包被孔孵育，血清样品中的特异性 IBV 抗体与包被的病毒抗原反应，形成复合物。经过洗涤，未结合的物质被去掉。微孔加入酶标抗体，酶标抗体可以与吸附在包被孔内的鸡抗体结合。反应后进行洗涤，未结合的酶标抗体被洗去。加入酶底物，随后的颜色反应强度与 血清中 IBV 抗体的数量直接相关。

		试剂	数量
1		IBV 抗原包被板	5 块
2		阳性对照—稀释的含 IBV 抗体的鸡血清，用叠氮化钠保护	1×1.9mL
3		阴性对照—稀释的不含 IBV 抗体的鸡血清，用叠氮化钠保护	1×1.9mL
4		酶标抗体—（山羊）抗鸡：辣根过氧化物酶（HRPO）结合物，庆大霉素和凯松保护	1×50mL
5		样品稀释液—用叠氮化钠保护	1×235mL
A		TMB 底物	1×60mL
B		终止液	1×60mL

自备器材

精确的单道移液器，多道移液器，一次性吸头，96 孔读数仪，样品稀释用试管，蒸馏水或去 离子水，洗液吸移装置。在操作步骤中所列出的试剂吸取体积要求移液器的误差不超过±5%。

注意事项

要认真处理所有的传染性支气管炎病毒（IBV）生物材料，以防 IBV 的传播。抗原包被的反应板有可能成为 IBV 的传染源。尽管在进行包被之前已对抗原进行了化学性的灭活处理，但不要假设它已完全灭活。一些试剂盒成份含有叠氮化钠作保护剂，要按照当地、区域以及国家法规 进行处理。不要使 TMB 溶液暴露在强光或任何氧化剂条件下。所有的组分贮存于 2-8℃。所有的组分在丢弃前要进行无害化处理。不要使用过期的组分，也不要把不同批次的试剂盒组分混用。

在整个操作过程中，滴加和洗涤要仔细。按照本程序操作，将会获得最佳结果。仅供兽医使用。

样品准备

在检测前用样品稀释液将样品作 500 倍稀释（1µL 的样品用样品稀释液稀释到 500µL）。注意不要稀释对照。每个样品都要换一个吸头。样品加入抗原包被孔之前要充分混合均匀。

操作步骤

所有试剂需回温至 18-26℃，颠倒摇动混合均匀。

1 取出包被板，记录样品位置。

2 在合适位置的两孔中加入100µL不需稀释的阴性对照。

3 在合适位置的两孔中加入100µL不需稀释的阳性对照。

4 加 100µL 稀释好的样品至相应的孔。样品可采用双孔检测也可采用单孔检测。

5 在18-26℃孵育30分钟（±2 分钟）。

6 将孔内的液体倒入合适废液筒内。

7 用大约350µL蒸馏水或去离子水洗涤微孔3-5次，最后一次洗涤后吸干板孔内液体。

8 每孔加入100µL 酶标抗体。

9 在18-26℃孵育30分钟（±2分钟）。

10 重复步骤6和7。

11 每孔加100µL TMB底物溶液。

12 在 18-26℃下孵育15分钟（±1分钟）。

13 每孔加100µL终止液终止反应。

14在 650nm测量和记录吸光值A（650）。

结果

只有在阳性对照平均值减去阴性对照平均值（PC - NC ）大于 0.075 时，且阴性对照平均 值小于或等于 0.150 时，测定结果才有效。IBV 抗体的存在与否由样品对阳性的 S/P 值来决定。阳性对照是标准化的，代表鸡血清的有效抗体水平。样品抗体的相对水平由样品对阳性的 S/P 比值来决定。终点滴度可以通过后面列出的关系式计算得出。

计算方法

1	阴性对照平均值（NC）	=NC
2	阳性对照平均值（PC ）	=PC
3	S/P 值
4	终点抗体滴度（1：500）与 S/P 的关系式：	滴度=1.09（S/P）+3.36

结果判定

血清样品的 S/P 值小于或等于 0.2，判为阴性。样品的 S/P 值大于 0.2（滴度大于 396），判为阳性，表明已接种过疫苗或感染过 IBV。每个实验室应建立独自的免疫的抗体滴度标准。此滴 度是根据实验室目前对 IBV 的检测方法和过去对特种疫苗和免疫方案的抗体反应两方面综合而定。在免疫时效期监测和记录有代表性样品的抗体滴度是鸡群的免疫状况的最好评价。得出的鸡群状况可对免疫全程中抗体滴度的分布和变化进行分析。

（5）购买时间及网上报名时间由原先的：

购买时间及网上报名时间：凡有意参加投标者，请于2015年5月25日起至2015年6月12日，每日9:00到12:00，14:30到17:30(北京时间，下同)，投标人须先在省级政府采购网上的电子化采购平台(http://cz.fjzfcg.gov.cn)上进行注册、报名、提交投标保证金底单，绑定CA卡(CA卡申请需提前办理。办理客服电话:0591-968806，地址: 福建省福州市温泉公园路188号，福建省数字安全证书管理有限公司)，经审核后才能进行电子投标活动。网上投标具体操作详见“福建省政府采购网(http://cz.fjzfcg.gov.cn)—下载专区—福建省政府采购电子化管理平台各角色操作手册—供应商投标操作手册”。

变更为：

购买招标文件时间：凡有意参加投标者，请于2015年5月25日起至2015年6月12日，每日9:00到12:00，14:30到17:30(北京时间，下同)【投标供应商办理报名手续后须于投标截止时间前在省级政府采购网上的电子化采购平台(http://cz.fjzfcg.gov.cn/page/login/login.jsp)上进行注册、报名、提交投标保证金底单，绑定CA卡(CA卡申请需提前办理。办理客服电话:0591-968806，地址: 福建省福州市温泉公园路188号，福建省数字安全证书管理有限公司)，经审核后才能进行电子投标活动。网上投标具体操作详见“福建省政府采购网—下载专区—福建省政府采购电子化管理平台各角色操作手册—供应商投标操作手册”。中标人需于中标后上传电子版的投标文件。】

（6）开标时间及截标时间由原先的：

投标截止时间：投标文件应于[2015年6月16日][上午9：00]（北京时间）之前提交到福建信发招标代理有限公司【福州市五一中路188号汉庭酒店2楼（汽车南站旁）】，逾期收到的或不符合规定的投标文件将被拒绝。

开标时间：[2015年6月16日][上午9：00]（北京时间）

变更为： 

投标截止时间：投标文件应于[2015年6月19日][上午10:00]（北京时间）之前提交到福建信发招标代理有限公司【福州市五一中路188号汉庭酒店2楼（汽车南站旁）】，逾期收到的或不符合规定的投标文件将被拒绝。

开标时间：[2015年6月19日][ 上午10:00]（北京时间）

（7）其他不变。

7.本公告为该项目招标文件的组成部分，请各潜在投标人务必认真阅读本公告，并按照本公告及该项目招标文件的规定和要求编制投标文件参与投标。

                                   

                                                      福建信发招标代理有限公司

                                                       2015年6月3日